大腸桿菌BBF生長(cháng)因素的反復探索

來(lái)源:投稿網(wǎng) 時(shí)間:2022-11-21 10:00:04

建立大腸桿菌和金黃色葡萄球菌生物膜(BBF)模型，調查注射雙黃連對BBF的影響和抑制作用。

1.BF模型的建立。

1.1.1.大腸桿菌0恒溫振蕩器(230~240轉/分鐘)大腸桿菌B復活粉中溶解后，在37℃溫度振蕩器(230~240轉/分鐘)中培養8小時(shí)，分裝離心。

1.1.2建立大腸桿菌BBF型的方法將放置在-80℃冰箱中的大腸桿菌劃在NB培養基的平板上，放置在恒溫培養箱中，36℃培養24小時(shí)。將平板上的單個(gè)菌落溶解在5mlNB液體培養基中，在36℃恒溫振蕩器中振蕩8小時(shí)，獲得單克隆細菌增殖培養的菌液備用。

將菌液稀釋100倍，放入96孔板中，以NB培養基為空白。放入恒溫培養箱中，在36℃下培養24小時(shí)，取出。將菌液傾倒，用蒸餾水反復清洗，加入0.1%結晶紫染色30分鐘后，將結晶紫傾倒洗凈，加入1%脫氧膽酸鈉溶液，30分鐘后測量600nm處的OD值。以菌液濃度為橫坐標，以OD值為縱坐標，調查BBF生長(cháng)情況。

1.通過(guò)對大腸桿菌BBF生長(cháng)因素的反復探索，我們發(fā)現影響大腸桿菌BBF生長(cháng)的主要因素如下：不同的大腸桿菌對BBF有很大的影響，直接影響B(tài)BF的生長(cháng)和BBF的形成。而且大腸桿菌代代相傳的越多，BBF的生長(cháng)越差，所以我們每次都使用第二代大腸桿菌。

②96孔板材料：不同材料96孔板上不同細菌的生長(cháng)條件不同。我們選擇了市場(chǎng)上常見(jiàn)的三種96孔板，即進(jìn)口聚氯乙烯（聚氯乙烯）板、國內聚苯乙烯（PS）板、進(jìn)口聚苯乙烯板和不同材料的96孔板上的大腸桿菌。因此，大腸桿菌在國內PS板上的生長(cháng)是最好的。

③培養時(shí)間：考慮到實(shí)驗操作時(shí)間的可行性，我們選擇分別培養大腸桿菌18小時(shí)、24小時(shí)和36小時(shí)，以調查BBF的生長(cháng)情況。因此，BBF在培養24小時(shí)后生長(cháng)最好。

1.建立金黃色葡萄球菌BBF模型的方法與大腸桿菌基本相同。這里沒(méi)有詳細的介紹。我們仍然調查了96孔板的材料、培養時(shí)間和液體濃度，最終確定金黃色葡萄球菌液稀釋100倍，在國內PS板上培養24小時(shí)，F的生長(cháng)最好、最穩定。

2.雙黃連對BBF的影響。

從C行到0行再到0行行，再到10行，再到10行。

培訓方法一:調查對BBF形成的影響。

按照96孔板點(diǎn)樣方法1完成后，恒溫培養箱按照大腸桿菌BBF模型建立方法放置，36℃培養24小時(shí)，以藥液濃度為橫座標，以平均OD值為縱坐標，繪制圖紙，調查對BBF的影響。

培養方法二:調查對BBF的抑制作用。首先，我們將96孔板上的所有菌液放入恒溫培養箱中，按照大腸桿菌BBF模型建立的方法，在36℃下培養24小時(shí)，取出。此時(shí)BBF已經(jīng)形成，將菌液傾出。按照96孔板點(diǎn)樣方法

2.對BBF形狀的影響。

圖1注射雙黃連對大腸桿菌BBF的影響。

將注射用雙黃連和水溶解，制成5mg/ml藥液，分別培養大腸桿菌和金黃色葡萄球菌。注射雙黃連對大腸桿菌BBF的影響如圖1所示。

3.討論。

1)通過(guò)實(shí)驗探索，建立了可靠穩定的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌生物膜(BBF)模型，確定了影響因素。

2)探索96孔板的清洗方法:96孔板的材質(zhì)是BBF模型成功建立的重要因素。確定96孔板的清洗方法:先在96孔板中加入洗液，浸泡3~5分鐘后，用手握住96孔板，將孔內液體甩干；然后用乙醇浸泡24小時(shí)，超聲20分鐘，自然晾干。

3)調查了注射雙黃連對BBF形成的影響。得出結論，注射雙黃連對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌BBF的形成有明顯的抑制作用。

4.結語(yǔ)。

本實(shí)驗建立了可靠穩定的BBF模型，調查了中藥注射雙黃連對BBF形成的影響，篩選出能抑制或破壞BBF形成的活性成分，為中藥開(kāi)發(fā)治療慢性傳染病的新藥提供了新的篩選模型，為科學(xué)客觀(guān)地評價(jià)中藥在慢性傳染病治療中的作用提供了新的方法。