非洲豬瘟病毒K205R蛋白單克隆抗體的制備與鑒定
摘要:將合成的非洲豬瘟病毒K205R基因序列插入pET-28a(+)表達載體,經(jīng)IPTG誘導表達pET-28a-K205R重組蛋白。用制備的重組抗原免疫BALB/c小鼠,采用化學(xué)融合方法融合、篩選,獲得了6A4、7F5和7G3三株抗K205R蛋白的雜交瘤細胞株。經(jīng)鑒定,這3株單克隆抗體(單抗)的亞類(lèi)均為IgG1型;單抗的腹水效價(jià)分別為1∶51200、1∶409600和1∶102400。將這3株雜交瘤細胞連續培養20代,在第20代仍有很高的分泌抗體的能力,表明其穩定性較好。Western-blot檢測結果表明,這3株單抗與K205R重組蛋白有良好的反應性和特異性。上述結果表明,本研究制備的這3株雜交瘤細胞株能夠穩定分泌抗體,分泌的抗體特異性高,為非洲豬瘟診斷技術(shù)的研究奠定了基礎。
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