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			加急見(jiàn)刊
		
        
		

		
		
        
			
        
				
				
				
        
					
					
        
						
						
        逆轉錄病毒介導的穩定表達E4orf1和綠色熒光蛋白的胎肝竇內皮細胞株的建立
        
						
        李慧琳; 謝小燕; 王思涵; 韓毅; 范增; 白云; 何麗娟; 南雪; 裴海云; 岳文; 裴雪濤  南方醫科大學(xué)檢驗與生物技術(shù)學(xué)院; 廣東廣州510515; 軍事科學(xué)院軍事醫學(xué)研究院衛生勤務(wù)與血液研究所軍事再生醫學(xué)研究室; 北京100850; 軍事科學(xué)院軍事醫學(xué)研究院輻射醫學(xué)研究所實(shí)驗血液學(xué)與生物化學(xué)研究室; 北京100850; 華南生物醫藥研究院華南干細胞與再生醫學(xué)研究中心; 廣東廣州510005
        

					
        
					
        摘要：目的：為構建優(yōu)化的內皮細胞用于造血干細胞（HSCs）的支持培養,通過(guò)逆轉錄病毒載體系統建立穩定表達腺病毒E4區開(kāi)放讀框1（E4orf1）和綠色熒光蛋白（GFP）的人胎肝竇內皮細胞（HFLSECs）株。方法：利用Plat-A細胞將質(zhì)粒MSCV-N E4orf1和p MX-GFP分別包裝為逆轉錄病毒,共同感染HFLSECs,將原代培養的HFLSECs和轉基因的HFLSECs分別在含有0.5、1、2、4μg/m L嘌呤霉素的EGM-2培養基中培養,以測試最適藥物篩選濃度,藥篩1周后通過(guò)流式細胞分選獲得穩定轉染E4orf1的GFP＋HFLSECs（E4orf1-GFP/HFLSECs）。通過(guò)密度梯度離心法從臍帶血中分離單個(gè)核細胞,利用免疫磁柱分選獲得CD34＋造血干/祖細胞（HSPCs）,以E4orf1-GFP/HFLSECs作為飼養層聯(lián)合SCF、TPO、Flt-3L等3種基礎造血相關(guān)因子進(jìn)行體外擴增和半固體造血細胞集落培養。結果：0.5μg/m L嘌呤霉素在5 d內即能完全殺死HFLSECs,而轉基因的HFLSECs可以正常存活,以此藥物濃度加壓篩選1周,后續通過(guò)流式分選GFP陽(yáng)性細胞,陽(yáng)性率為90.5%,在E4orf1-GFP/HFLSECs飼養層支持下,人臍帶血來(lái)源的CD34＋細胞15 d擴增了360倍,是單純細胞因子懸浮培養組的2.2倍,且擴增后的HSPCs在體外仍具有多種造血集落形成能力。結論：該細胞株的建立將為構建造血干細胞體外培養體系及研究造血細胞的發(fā)育分化提供適宜的微環(huán)境。
        
					
        注: 保護知識產(chǎn)權,如需閱讀全文請聯(lián)系生物技術(shù)通訊雜志社
        
				
        
				

			
        
		
        

		
		

	
        

	
	
	
	
	
	
	
	


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