四重熒光qRT-PCR檢測豬腹瀉相關(guān)病毒方法的建立
摘要:為建立同時(shí)檢測豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、豬傳染性胃腸炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、豬delta冠狀病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)和豬捷申病毒(Porcine teschovirus,PTV)的四重熒光qRT-PCR檢測方法,本研究以PEDV的N基因、TGEV的S基因、PDCoV的M基因和PTV基因組5'非編碼基因為檢測對象,建立同時(shí)檢測4種病毒的熒光RT-PCR方法。結果顯示,該方法可以特異擴增4種病毒的基因,不能擴增豬呼吸道冠狀病毒、偽狂犬病毒、豬瘟病毒、口蹄疫病毒、豬細小病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬圓環(huán)病毒2型的基因;PEDV、TGEV、PDCoV和PTV的最低核酸檢出量分別為141、68、8和11拷貝數;對100份送檢樣品進(jìn)行檢測,其中PEDV、TGEV、PDCoV和PTV感染檢出率分別為10%、6%、2%和55%。結果表明本研究建立的檢測方法具有良好的特異性和敏感性,而且操作快速簡(jiǎn)便,可用于豬腹瀉疫病的臨床診斷和流行病學(xué)調查。
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