定向進(jìn)化后Cne PRP8蛋白質(zhì)內含子的剪接機理研究
摘要:蛋白質(zhì)內含子(intein)介導的蛋白質(zhì)剪接(protein splicing)為蛋白質(zhì)工程的發(fā)展展現了無(wú)限的新希望。但是到目前為止蛋白質(zhì)剪接機理尚未清楚,因而它極大地制約了蛋白質(zhì)內含子及其介導的蛋白質(zhì)剪接在蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域的廣泛應用。以來(lái)自于真核生物核基因組中的蛋白質(zhì)內含子 Cne PRP8為研究對象,通過(guò)“隨機突變-功能選擇-定向進(jìn)化”后,對進(jìn)化后的蛋白質(zhì)內含子 Cne PRP8關(guān)鍵部位氨基酸進(jìn)行突變、恢復突變,試圖揭示 Cne PRP8蛋白質(zhì)內含子的剪接機理。研究結果表明, Cne PRP8蛋白質(zhì)內含子的剪接仍然與其1位和正1位相關(guān),但其剪接反應還與其52位、68位、114位和146位的氨基酸相關(guān),推測該位氨基酸的突變改變了剪接活性中心的空間構象,從而影響了蛋白質(zhì)內含子的剪接。這一研究揭示了真核生物蛋白質(zhì)內含子的剪接過(guò)程不僅與其1位和正1位等氨基酸殘基相關(guān),也與其他位點(diǎn)氨基酸密切相關(guān),仍需進(jìn)一步探索與研究。
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