毛細管區帶電泳-紅色激光誘導熒光檢測磷酸化氨基酸
摘要:以自行設計合成的1,7-二甲基-3,5-二苯乙烯基-8-苯基-(4′-氧乙酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯)-二氟化硼-二吡咯甲烷(DMDSPAB-OSu)為高活性紅色熒光衍生試劑,建立了毛細管區帶電泳-激光誘導熒光(CZE-LIF)分離檢測磷酸化蘇氨酸、磷酸化絲氨酸和磷酸化酪氨酸的新方法。DMDSPAB-OSu具有量子產(chǎn)率高、光穩定性好、熒光不受pH和溶劑影響等優(yōu)勢,且其熒光波長(cháng)與紅色半導體激光檢測器匹配,可有效減少生物基質(zhì)內源性熒光干擾。在0.07 mol·L~(-1)H3BO3-Na2B4O7緩沖溶液(pH=8.5)中,DMDSPAB-OSu與3種磷酸化氨基酸的衍生反應室溫下僅需5 min,衍生產(chǎn)物可在17.5min內實(shí)現基線(xiàn)分離,激光誘導熒光檢測檢出限(S/N=3)為1.5~3.2nmol·L~(-1),方法用于牛奶酪蛋白樣品檢測,回收率為91.1%~103.8%。
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