實(shí)驗室快速檢測細胞株支原體污染的方法研究
摘要:目的建立快速可靠的實(shí)驗室檢測細胞株培養中支原體污染的方法。方法采用DNA熒光染色試劑對本實(shí)驗室11株細胞進(jìn)行熒光染色觀(guān)察與分析;同時(shí)從常見(jiàn)污染細胞的支原體16SrRNA中選擇兩段高度保守的核酸序列,作為支原體引物,采用聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)法對同一批細胞株進(jìn)行檢測,并對兩種檢測結果進(jìn)行比較。結果采用DNA熒光染色法檢出11株細胞中有2株細胞出現陽(yáng)性,陽(yáng)性率為18.2%;采用PCR方法檢測11株細胞,有4株細胞出現陽(yáng)性,陽(yáng)性率為36.4%。通過(guò)兩種方法比較可以發(fā)現:DNA熒光染色法檢測結果陽(yáng)性的細胞株用PCR方法檢測結果也是陽(yáng)性。結論上述兩種方法均能有效地檢出細胞株中的支原體污染,DNA熒光染色法雖較PCR法靈敏度低,但操作簡(jiǎn)便易觀(guān)察;而PCR法成本較高,將兩種方法結合應用,對DNA熒光染色法可疑陽(yáng)性的標本再進(jìn)行PCR檢測,既提高陽(yáng)性檢出率,又節約了成本。
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