一種海島棉U6啟動(dòng)子在CRISPR/Cas9基因組編輯體系中的功能鑒定
摘要:U6啟動(dòng)子是CRISPR/Cas9基因編輯系統的重要元件之一。本研究以實(shí)驗室已克隆的海島棉U6啟動(dòng)子構建GbU6-1P啟動(dòng)子驅動(dòng)sgRNA,構建以抗旱負調控基因GGB為靶序列的CRISPR/Cas9基因編輯載體,轉入棉花‘新海16號’原生質(zhì)體中,進(jìn)行功能鑒定。經(jīng)酶切實(shí)驗驗證、測序、數據統計等確認GbU6-1P啟動(dòng)子在基因編輯系統中的效果。結果表明,以GbU6-1P啟動(dòng)子構建的CRISPR/Cas9基因編輯體系可以成功地定點(diǎn)編輯棉花內源靶基因GGB,引起基因突變,突變率為34.5%,突變類(lèi)型全部為堿基替換。
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