摘要：目的:研究白介素12A(IL-12A)促進(jìn)CD4+CD25-T細胞向CD4+CD25+Foxp3+Treg(iTreg)增殖分化的作用。方法:采用免疫磁珠分選法分選出臍帶血中CD4+CD25-T細胞,實(shí)驗組和對照組均采用抗CD3和抗CD28單克隆抗體活化,并加入10ng/mL的TGF-β1誘導,而實(shí)驗組加入5ng/mL的IL-12A同時(shí)誘導。細胞培養72h后,采用流式細胞術(shù)(FACS)檢測CD4+CD25+Foxp3+Treg(iTreg)細胞的比例,蛋白免疫印跡(Western-Blot)法檢測細胞中Foxp3、Smad2、Smad3、Smad6的表達,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測TGF-β1、Foxp3、Smad2、Smad3、Smad6的mRNA表達。體外共培養誘導后iTreg和CD4+CD25-T細胞,CCK-8法評價(jià)淋巴細胞活性。體外加入5ng/mL的IL-12A與iTreg、CD4+CD25-T細胞共培養檢測IL-12A協(xié)同iTreg對于CD4+CD25-T細胞活性的影響。結果:FACS檢測,IL-12A可以促進(jìn)CD4+CD25-T向iTreg的分化,CCK-8結果顯示,iTreg可以以濃度依賴(lài)方式抑制CD4+CD25-T細胞活性。而IL-12A可以協(xié)同iTreg對于CD4+CD25-T細胞活性的抑制作用。Western-Blot和RT-QPCR結果顯示,iTreg分化過(guò)程中Foxp3、Smad2、Smad3、Smad6的表達水平增高,且相關(guān)mRNA的水平也增高。結論:IL-12A可以促進(jìn)iTreg的誘導分化,對于效應T細胞的抑制有著(zhù)一定的協(xié)同作用。

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