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      1. 加急見(jiàn)刊

        建立人α突觸核蛋白A30P突變的帕金森病大鼠模型

        宋娜; 王海軍; 李宏彬; 邵明龍; 張偉; 谷騰騰; 胡慶; 余建; 張景航; 蘇蔚; 趙鐵鎖; 李雨姍 新鄉醫學(xué)院基礎醫學(xué)院; 新鄉醫學(xué)院公共衛生學(xué)院; 河南省精神病醫院; 河南省生物精神病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗室; 新鄉醫學(xué)院第二附屬醫院; 新鄉醫學(xué)院第一附屬醫院; 河南新鄉453003

        摘要:目的 建立人α-突觸核蛋白(α-synuclein,α-SYN)A30P突變型轉基因大鼠的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型。方法 利用慢病毒系統構建過(guò)表達野生型α-SYN載體pLKO-CMV-α-SYN-WT-P2A-GFP及α-SYN A30P突變載體pLKO-CMV-α-SYN-A30P-P2A-GFP,分別轉染293FT細胞,瞬時(shí)轉染24 h后WB檢測α-SYN的表達水平。之后經(jīng)慢病毒包裝、濃縮,利用立體定位技術(shù)分別對大鼠中腦黑質(zhì)致密部注射病毒稀釋液,過(guò)表達α-SYN野生型和A30P突變型的慢病毒顆粒。免疫熒光染色檢測α-SYN和酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的分布情況,并觀(guān)察中腦黑質(zhì)致密部多巴胺能神經(jīng)元數量的變化。Rotating rod實(shí)驗評價(jià)注射A30P慢病毒大鼠的行為改變情況。結果 野生型和突變型A30P的基因表達載體在293FT細胞內能夠高表達α-SYN蛋白。TH免疫熒光結果顯示:與病毒稀釋液組相比,過(guò)表達α-SYN野生型和A30P突變型大鼠均能導致中腦黑質(zhì)致密部多巴胺能神經(jīng)元數量的減少,而α-SYN A30P慢病毒注射組的中腦黑質(zhì)神經(jīng)元缺失的更多,具有顯著(zhù)性差異。對A30P轉基因大鼠腦部神經(jīng)元缺失部位進(jìn)行免疫熒光發(fā)現,該區域TH染色幾乎呈陰性,α-SYN蛋白出現大量聚集,該結果表明腦部神經(jīng)元的消失同時(shí)伴隨著(zhù)α-SYN蛋白的聚集及TH表達的劇烈減少,進(jìn)一步揭示過(guò)表達α-SYN A30P可以導致多巴胺能神經(jīng)元數量的減少和退化。此外,rotating rod實(shí)驗結果顯示過(guò)表達α-SYN A30P大鼠表現出明顯的進(jìn)行性運動(dòng)能力障礙。結論 通過(guò)慢病毒系統建立了人α-SYN A30P突變型轉基因大鼠的PD模型,為PD發(fā)病機制的研究及藥物開(kāi)發(fā)奠定基礎。

        注: 保護知識產(chǎn)權,如需閱讀全文請聯(lián)系中國實(shí)驗動(dòng)物學(xué)報雜志社

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