田旋花EPSPS基因表達載體的構建及擬南芥轉化
摘要:根據田旋花(Convolvulus arvensis L.)EPSPS基因(Gen Bank登錄號:EU698030)c DNA序列,設計含有酶切位點(diǎn)的特異性引物,以田旋花c DNA為模板,合成EPSPS基因并連接到含有35S啟動(dòng)子和GUS基因的p BI121載體上,成功構建植物超表達載體p BI-EPSPS。采用氯化鈣凍融法將其轉入根癌農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)中,然后用根癌農桿菌介導法轉化擬南芥(Arabidopsis thaliana),共獲得15株卡那霉素抗性擬南芥苗。對其中的5株進(jìn)行PCR和RT-PCR檢測,結果表明EPSPS基因已整合到擬南芥的基因組中并可以表達。
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