摘要：【目的】棉蚜(Aphis gossypii)是棉花主要害蟲(chóng)之一,嚴重危害棉花的生產(chǎn)。利用靶標昆蟲(chóng)重要基因的雙鏈RNA進(jìn)行干涉從而防治農業(yè)害蟲(chóng)是當今發(fā)展的1種新技術(shù)。通過(guò)轉基因的方法,在棉花中表達棉蚜靶標基因的雙鏈RNA(Double stranded RNA,dsRNA),特異性地抑制棉蚜內源基因的表達,從而控制蚜蟲(chóng)對棉花的危害?！痉椒ā勘狙芯坷妹扪料佘杖姿崦窫亞基(Adenosine triphosphatase subunit E,ATPase E)基因,構建其RNA干擾載體,并通過(guò)農桿菌介導轉化棉花。PCR技術(shù)初步篩查45個(gè)獨立轉化植株,對PCR陽(yáng)性植株進(jìn)行DNA印跡(Southern blot)分析,確認外源基因插入的拷貝數。同時(shí)利用RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction)方法檢測dsRNA的表達情況。最后結合網(wǎng)棚和大田抗蚜性鑒定分析轉基因株系的抗蚜效果?！窘Y果】從45個(gè)轉基因再生植株中獲得22株陽(yáng)性轉基因株,其中12株為單拷貝插入。根據農藝性狀和dsRNA表達量分析結果,篩選出4個(gè)轉基因株系,分別為CZ1、CZ2、CZ3和CZ4。2年的網(wǎng)棚和大田的蚜蟲(chóng)抗性鑒定結果表明:轉基因棉花CZ1、CZ2和CZ3具有較高的抗蚜性,2015年和2016年的蚜害減退率分別達70%和60%以上?！窘Y論】利用RNAi技術(shù)將蚜蟲(chóng)腺苷三磷酸酶E亞基基因片段轉化棉花,可以提高棉花的抗蚜性,為棉花抗蚜育種提供了新種質(zhì)和新方法。

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