摘要：為建立基于納米抗體的檢測日本血吸蟲(chóng)感染的膠體金免疫層析技術(shù)，將已經(jīng)通過(guò)噬菌體文庫篩選得到的兩株納米抗體的質(zhì)粒，在枯草芽孢桿菌中表達，得到具有活性的抗體蛋白（VHH-48、VHH-52）并以NI-NTA親合層析純化。以檸檬酸三鈉還原法制備膠體金溶液，標記VHH-48和VHH-52抗體蛋白并制備金標墊，分別用日本血吸蟲(chóng)可溶性蟲(chóng)卵抗原（SEA）和羊抗鼠IgG作為檢測線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)，確定抗體蛋白的最佳標記pH和最適蛋白濃度。采用抗體雙夾心的方法對兩株抗體蛋白進(jìn)行組合，建立膠體金免疫層析方法。以?xún)?yōu)化的雙夾心抗體組合，組裝試紙條，進(jìn)行了靈敏度的測定和血吸蟲(chóng)病人糞檢陽(yáng)性血清的敏感性評估，以并殖吸蟲(chóng)等其他寄生蟲(chóng)感染的血清測定了試紙條的特異性。結果顯示，成功表達并獲得了純度較高的納米抗體。膠體金標記VHH-48和VHH-52抗體的最適蛋白量為14和10μg／mL，最適pH分別需要加入16和12μL體積的0．2mol／LK2CO3，并確定以VHH-52標金和VHH52劃線(xiàn)為最佳的抗體雙夾心組合。對可溶性蟲(chóng)卵抗原的最低檢測量為3．4ng／mL，檢測血吸蟲(chóng)病人陽(yáng)性血清的檢出率為2．27％，檢測其他寄生蟲(chóng)感染血清結果顯示出良好的特異性。本文構建了基于日本血吸蟲(chóng)SEA納米抗體的膠體金免疫層析試紙條方法，為納米抗體在血吸蟲(chóng)病快速診斷的應用奠定了一定基礎。

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