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			加急見(jiàn)刊
		
        
		

		
		
        
			
        
				
				
				
        
					
					
        
						
						
        非洲豬瘟病毒p54抗原C端的原核表達及多克隆抗體的制備與鑒定
        
						
        馮春燕; 王彩霞; 杜方原; 張永寧; 劉丹丹; 林祥梅; 吳紹強  中國檢驗檢疫科學(xué)研究院動(dòng)物檢疫研究所; 北京100176
        

					
        
					
        摘要：利用大腸埃希菌表達非洲豬瘟病毒核心抗原p54蛋白C末端55個(gè)氨基酸的肽段(命名為p54-2),制備了多克隆抗體并進(jìn)行了純化,以進(jìn)一步用于非洲豬瘟ELISA試劑盒的研發(fā)。將PCR擴增獲得的p54-2目的片段與表達載體pGEX6p-1質(zhì)粒均經(jīng)過(guò)限制性?xún)惹蠦amHⅠ和XhoⅠ雙酶切后,構建pGEX6p-1-ASFV-P54-2原核表達質(zhì)粒。將該質(zhì)粒轉化到大腸埃希菌BL21中,誘導蛋白大量表達,并純化獲得高純度的蛋白。將純化的p54-2蛋白免疫小鼠,獲得p54-2多克隆抗體并進(jìn)一步純化多抗。用ELISA、Westernblot對純化的多克隆抗體進(jìn)行效價(jià)滴定及特異性鑒定。結果顯示,成功構建了pGEX6p-1-ASFV-P54-2重組質(zhì)粒,在大腸埃希菌中IPTG誘導下,能夠高效表達重組p54-2蛋白。用p54-2蛋白免疫Balb/c小鼠獲得的多克隆抗體經(jīng)ELISA檢測其抗體效價(jià)為1∶128000,說(shuō)明該蛋白有很好的免疫原性。Westernblot結果顯示,制備的多克隆抗體能特異性識別非洲豬瘟病毒p54胞內區,具有較高反應性和特異性,可以用于ELISA檢測方法研究和p54抗原表位的鑒定。
        
					
        注: 保護知識產(chǎn)權,如需閱讀全文請聯(lián)系動(dòng)物醫學(xué)進(jìn)展雜志社
        
				
        
				

			
        
		
        

		
		

	
        

	
	
	
	
	
	
	
	


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