毛皮動(dòng)物源大腸埃希菌毒力基因二重PCR檢測方法的建立
摘要:為了建立一種能夠快速檢測毛皮動(dòng)物源大腸埃希菌耶爾森菌強毒力島(HPI)中irp2、FyuA毒力基因的二重PCR方法,根據GenBank中irp2、FyuA基因的序列,設計并合成兩對引物,擴增得到irp2、FyuA基因片段,大小分別為300bp和951bp。據此建立雙重PCR方法,并將反應條件進(jìn)行了優(yōu)化。結果表明,用所建立的二重PCR方法可同時(shí)特異性擴增出大腸埃希菌irp2、FyuA毒力基因片段,對沙門(mén)菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、克雷伯菌均無(wú)特異性擴增。菌液最低檢出量為2.8×105CFU/mL。在78份臨床樣品檢測中,二重PCR檢測結果與常規PCR檢測結果一致。所建立的大腸埃希菌irp2、FyuA毒力基因二重PCR檢測方法具有很好的特異性和靈敏度,能夠提高臨床樣品檢測的效率。
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