高清无遮挡毛片基地_淡水漁業(yè)雜志文獻閱讀_不同基因型草魚(yú)呼腸孤病毒通用RT-PCR檢測方法的建立及應用

不同基因型草魚(yú)呼腸孤病毒通用RT-PCR檢測方法的建立及應用

范玉頂; 馬杰; 周勇; 江南; 劉文枝; 曾令兵中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長(cháng)江水產(chǎn)研究所; 武漢430223; 愛(ài)達荷大學(xué)水產(chǎn)研究所魚(yú)類(lèi)與野生動(dòng)物科學(xué)系; 莫斯科83844-1136; 美國

摘要：根據GenBank登錄的草魚(yú)呼腸孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)不同基因型毒株編碼VP2蛋白的S2節段保守序列,設計1對簡(jiǎn)并引物,通過(guò)優(yōu)化反應條件及靈敏度和特異性評價(jià),建立了一種能同時(shí)檢測三種基因型GCRV的通用RT-PCR檢測方法。結果顯示:該方法在三種基因型GCRV中均擴增出大小約590 bp的特異性條帶;靈敏度試驗結果顯示,該方法對于I、Ⅱ、Ⅲ型GCRV的檢測限分別為380、250和380拷貝/μL。該方法可特異性地檢測目前已知的三種基因型GCRV,而在大鯢虹彩病毒(GSIV)、錦鯉皰疹病毒(KHV)、鯉皰疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)、鯉春病毒血癥病毒(SVCV)和傳染性脾腎壞死病毒(ISKNV)中無(wú)擴增產(chǎn)物。利用該方法檢測49份草魚(yú)出血病疑似樣品,結果顯示均為GCRV陽(yáng)性,其中I型陽(yáng)性率為8.2%,Ⅱ型陽(yáng)性率為85.7%,Ⅲ型陽(yáng)性率為2%,I、Ⅱ型混合感染陽(yáng)性率為4.1%,其他類(lèi)型的混合感染未檢測到。結果表明,本研究建立的針對I、Ⅱ和Ⅲ型GCRV的RT-PCR檢測方法具有通用性好、省時(shí)高效的突出特點(diǎn),同時(shí)還兼具較高的靈敏度和特異性。

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