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			加急見(jiàn)刊
		
        
		

		
		
        
			
        
				
				
				
        
					
					
        
						
						
        水痘-帶狀皰疹病毒糖蛋白gE在昆蟲(chóng)細胞中的表達鑒定及其晶體培養
        
						
        姚巧繽; 李婷婷; 榮芮; 張玉云; 李澤凱; 薛文輝; 李瑾瑾; 朱瑞; 程通; 顧穎; 夏寧邵; 李少偉  廈門(mén)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院國家傳染病診斷試劑與疫苗工程技術(shù)研究中心; 福建廈門(mén)361102; 廈門(mén)大學(xué)公共衛生學(xué)院分子疫苗學(xué)與分子診斷學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗室
        

					
        
					
        摘要：目的利用桿狀病毒-昆蟲(chóng)表達系統建立純化水痘帶狀皰疹病毒(VZV)包膜糖蛋白gE的方法,篩選gE蛋白的晶體培養條件,以期用于結構解析。方法將VZV糖蛋白gE基因序列克隆至桿狀表達載體pAcgp67B載體中,利用High FiveTM昆蟲(chóng)細胞表達gE蛋白并進(jìn)行TALON親和層析純化;利用WAVE生物波浪反應器建立含硒代甲硫氨酸的gE蛋白方法,以便在晶體結構解析中利用單波長(cháng)或多波長(cháng)異常散射進(jìn)行相位解析;通過(guò)分子排阻色譜、分析超離,差示掃描量熱法和酶聯(lián)免疫吸附試驗等分析gE蛋白的理化性質(zhì);利用結晶試劑盒對gE498和gE354蛋白的結晶條件進(jìn)行初篩。結果獲得的gE498和gE354蛋白純度約為90%、產(chǎn)量為8~10 mg/L。理化分析顯示兩種gE蛋白在溶液中主要以均一穩定的單體形式存在,并呈現出良好的反應原性。在gE354晶體初篩中獲得3個(gè)結晶條件:CrystalH3、PEGH12和IndexB10。結論建立了VZV糖蛋白gE表達和純化方法,制備的蛋白純度高,且具有反應原性,并篩選出CrystalH3、PEGH12和IndexB10這3個(gè)結晶條件,為gE糖蛋白的結構與功能研究及新型疫苗開(kāi)發(fā)奠定了基礎。
        
					
        注: 保護知識產(chǎn)權,如需閱讀全文請聯(lián)系中國病原生物學(xué)雜志社
        
				
        
				

			
        
		
        

		
		

	
        

	
	
	
	
	
	
	
	


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