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			加急見(jiàn)刊
		
        
		

		
		
        
			
        
				
				
				
        
					
					
        
						
						
        正調控元件拷貝數對黑曲霉PglaA啟動(dòng)子的影響
        
						
        李杰; 丁純潔; 鄢健楠; 安欣; 劉天奇; 張會(huì )  東北農業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院; 哈爾濱150030
        

					
        
					
        摘要：為獲得轉錄水平更高的強啟動(dòng)子,提高黑曲霉中重組蛋白表達量,研究在黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因啟動(dòng)子PglaA基礎上,構建分別含2、4、6個(gè)拷貝的正調控元件片段PglaA2R、PglaA4R、PglaA6R啟動(dòng)子。以黑曲霉木聚糖酶基因xynB為目的基因,研究正調控元件拷貝數對PglaA啟動(dòng)子的影響。構建黑曲霉表達載體pSZHG2R-xynB、pSZHG4R-xynB、pSZHG6R-xynB,采用農桿菌介導法轉化黑曲霉CICC2462。獲得目的基因表達框整合在葡萄糖淀粉酶基因位點(diǎn)的純合黑曲霉重組菌株P(guān)glaA2R-xynB、PglaA4R-xynB、PglaA6R-xynB。經(jīng)SDS-PAGE檢測觀(guān)察到重組菌株分泌約24.0ku木聚糖酶蛋白條帶。經(jīng)酶活檢測表明,木聚糖酶活力在第8天達最高,重組菌株P(guān)glaA4R-xynB(7705.36U mL^-1)、PglaA6R-xynB(8466.32U mL^-1)比PglaA2R-xynB(5890.77U mL^-1)分別提高1.31倍和1.44倍。熒光定量PCR結果表明,重組菌株P(guān)glaA4R-xynB、PglaA6R-xynB的xynB基因mRNA比PglaA2R-xynB分別提高2.2倍和5.3倍?？芍?PglaA啟動(dòng)子正調控元件多拷貝顯著(zhù)提高木聚糖酶表達。
        
					
        注: 保護知識產(chǎn)權,如需閱讀全文請聯(lián)系東北農業(yè)大學(xué)學(xué)報雜志社
        
				
        
				

			
        
		
        

		
		

	
        

	
	
	
	
	
	
	
	


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