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			加急見(jiàn)刊
		
        
		

		
		
        
			
        
				
				
				
        
					
					
        
						
						
        利用雙重sgRNAs構建miR-223全基因敲除小鼠
        
						
        趙宣; 王曉亞; 劉莉; 劉佩娟; 辛智倩; 師長(cháng)宏; 張彩勤; 白冰; 黃勇; 張海  空軍軍醫大學(xué)實(shí)驗動(dòng)物中心; 西安710032; 西北農林科技大學(xué)動(dòng)物醫學(xué)院; 陜西楊凌712100; 西北工業(yè)大學(xué)生命學(xué)院; 西安710068
        

					
        
					
        摘要：目的 利用雙重sgRNAs構建miR-223全基因敲除小鼠。方法 針對miR-223基因設計雙重sgRNAs,將體外轉錄的sgRNAs和Cas9 mRNA共同顯微注射入C57BL/6小鼠受精卵細胞。小鼠出生后取其基因組DNA進(jìn)行PCR擴增和測序以鑒定基因型,同時(shí)取小鼠肝臟研磨后提取總RNA,通過(guò)real-time PCR分析miR-223在肝臟中的表達。結果 設計了miR-223基因雙重sgRNAs并對其進(jìn)行了體外轉錄,純化后顯微注射小鼠受精卵細胞獲得miR-223基因突變小鼠。測序結果表明突變小鼠有3種基因型,一種為6 bp的缺失突變,但未對miR-223序列產(chǎn)生影響;另外兩種為162 bp和168 bp的缺失突變,完全刪除miR-223前體和成熟區序列。與野生型相比,這兩種小鼠肝組織中幾乎不能檢測到miR-223的表達。結論 設計雙重sgRNAs并應用CRISPR/Cas9技術(shù)成功構建miR-223全基因敲除小鼠。
        
					
        注: 保護知識產(chǎn)權,如需閱讀全文請聯(lián)系中國比較醫學(xué)雜志社
        
				
        
				

			
        
		
        

		
		

	
        

	
	
	
	
	
	
	
	


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