二維電泳分析胎兒酒精綜合征斑馬魚(yú)模型蛋白表達譜
摘要:目的 利用二維電泳分析乙醇誘導斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育畸形的可能分子機制。方法采用400mmol/L乙醇在斑馬魚(yú)胚胎圓頂期處理3h,觀(guān)察乙醇導致的斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育畸形;通過(guò)二維凝膠電泳分析受精卵期、圓頂期、胚盾期和5體節期的胚胎總蛋白,采用差減分析法減少母源性蛋白的干擾,比較5-體節期正常對照組和乙醇處理組斑馬魚(yú)胚胎蛋白表達譜的改變;通過(guò)原位雜交驗證二維電泳的分析結果。結果400mmol/L乙醇處理導致62%的胚胎產(chǎn)生體軸發(fā)育障礙和60%的胚胎產(chǎn)生獨眼畸形。二維電泳分析結果顯示,400mmol/L乙醇處理會(huì )導致受精后12h(12hourspostfertilization,12hpf)斑馬魚(yú)胚胎膠原蛋白2al和TARDNA結合蛋白表達分別下調81%和73%。隨后原位雜交顯示,膠原蛋白2al在乙醇處理組胚胎體軸的表達明顯下調;24hpf乙醇處理胚胎膠原蛋白2al在胚胎體軸的表達水平逐漸恢復正常,但神經(jīng)管結構受到嚴重影響。結論乙醇處理后斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育畸形可能是由于乙醇干擾了胚胎發(fā)育過(guò)程中膠原蛋白2al和TARDNA結合蛋白的表達;其中乙醇對膠原蛋白2al在軸中胚層早期表達的干擾,可能是導致發(fā)育后期體軸和神經(jīng)管畸形的重要原因。
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