介導pcDNA-IGF-1質(zhì)粒轉染骨髓間充質(zhì)干細胞兩種方法比較
摘要:目的比較陽(yáng)離子聚合物Xfect與PDS-1000基因槍系統轉染人骨髓間充質(zhì)干細胞(hBMSCs)的轉染效率及兩種方法對細胞增殖能力的影響。方法應用貼壁法原代培養hBMSCs,取第3代細胞以流式細胞術(shù)鑒定細胞表面抗原CD29、CD34、CD45、CD90,并分別用Xfect與PDS-1000基因槍系統將pcDNA-胰島素樣生長(cháng)因子1(IGF-1)質(zhì)粒轉導入hBMSCs中。轉染后在不同時(shí)間點(diǎn)使用倒置熒光顯微鏡觀(guān)察綠色熒光,計數陽(yáng)性細胞,計算細胞轉染率及細胞漂浮率;以酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法檢測IGF-1分泌量。結果 hBMSCs培養成功后,高表達CD29、CD90,低表達CD34、CD45。在轉染后1、2d,兩種方法細胞轉染率差異有統計學(xué)意義(t=4.734、5.324,P〈0.05)。兩種方法轉染后細胞IGF-1分泌量均較轉染前增加,但兩種方法間比較差異有統計學(xué)意義(t=2.220-10.678,P〈0.05)。兩種方法轉染均有部分細胞脫落。結論兩種方法均可將pcDNA-IGF-1基因轉染入hBMSCs內,轉染后細胞能分泌IGF-1。Xfect轉染試劑轉染效率較高,PDS-1000基因槍系統轉染效率較低,兩者對細胞都造成一定損傷。
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