一種改良大鼠海馬神經(jīng)元原代培養的方法
摘要：目的為缺血性腦損傷模型的制備及研究建立一種更好的體外培養海馬神經(jīng)元的方法。方法實(shí)驗組取出生24h內的Wistar新生鼠海馬,用木瓜酶和DNA酶消化,以1×108/L的密度接種于含體積分數0.20胎牛血清的DMEM-F12培養液中,24h后更換無(wú)血清培養液,每隔3d半量換液。對照組采用傳統的培養方法培養細胞。培養期間用倒置顯微鏡觀(guān)察細胞形態(tài)及數量變化。采用免疫熒光法測定神經(jīng)元特異性烯醇化酶表達,判斷海馬神經(jīng)元培養是否成功。結果實(shí)驗組的海馬神經(jīng)元培養12h,可見(jiàn)大部分細胞貼壁;培養24h,大部分細胞可見(jiàn)3-4個(gè)突起,突起長(cháng)度為（25.0±2.5）μm;培養3d,神經(jīng)元胞體增大,可見(jiàn)明顯光暈;之后神經(jīng)元分化逐漸成熟,胞體透亮,呈錐形或多極形,光暈明顯,神經(jīng)元之間的突起聯(lián)系更加緊密,形成密集的神經(jīng)細胞網(wǎng)絡(luò );培養13d后,神經(jīng)元細胞開(kāi)始退化、變性,胞體萎縮,神經(jīng)細胞網(wǎng)絡(luò )開(kāi)始老化。隨著(zhù)培養天數的增加,神經(jīng)元可出現少量凋亡,但實(shí)驗組培養1、3、5、8d時(shí)的神經(jīng)元數量明顯高于對照組（t=11.5-49.5,P〈0.05）。免疫熒光法鑒定顯示,實(shí)驗組神經(jīng)元細胞陽(yáng)性率為（93.53±1.67）%。結論用上述改良方法培養得到的海馬神經(jīng)元細胞生長(cháng)狀態(tài)良好,可用于后續實(shí)驗研究。
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