聚乙二醇定點(diǎn)修飾β-乳球蛋白谷氨酰胺殘基條件優(yōu)化及其對蛋白抗原性的影響
摘要:采用谷氨酰胺轉氨酶(TG酶)催化聚乙二醇(PEG)定點(diǎn)修飾技術(shù)對β-乳球蛋白(β-LG)的谷氨酰胺殘基進(jìn)行修飾,探究其對蛋白抗原性的影響。通過(guò)SDS-PAGE結合凝膠過(guò)濾色譜對修飾產(chǎn)物的修飾率進(jìn)行分析,通過(guò)優(yōu)化得最佳修飾條件為pH 7.0,溫度25℃,β-LG與PEG摩爾比1:15,TG酶與β-LG質(zhì)量比3:1,緩沖液中乙醇添加量25%(體積分數),該條件下修飾率為60.17%。采用陽(yáng)離子交換色譜對修飾產(chǎn)物進(jìn)行分離純化,SDS-PAGE分析顯示,純化得到的修飾產(chǎn)物表觀(guān)分子量在28kDa左右,為PEG單修飾產(chǎn)物。反相高效液相色譜分析結果表明,修飾產(chǎn)物均一,無(wú)其它位置異構體存在。間接競爭ELISA測定結果表明,經(jīng)PEG修飾后β-LG的抗原性顯著(zhù)降低,降低率為59.04%。
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